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SEC分析中樣品吸附的改善——流動相及色譜柱應對策略

東曹分離與純化
2023.4.14

使用尺寸排阻色譜法（SEC）分離生物大分子時，有時會發生因樣品吸附在色譜柱上，而導致色譜圖變化或出現異常洗脫峰的現象。該現象往往是樣品的疏水性和靜電作用引起的，有時在分離時反映為色譜柱間差異。

為解決這類問題，可以通過向流動相中添加各種試劑來抑制吸附，以實現正常的SEC分離。

本篇推送中我們匯總了可以抑制樣品與色譜柱之間相互作用的試劑種類，并歸納了不同SEC流動相改善色譜分離效果的示例。希望能給大家的分析工作提供參考。

01

可添加試劑的種類及效果

02

不同SEC流動相的改善示例

下表是按照樣品分類歸納了SEC流動相對樣品吸附、相互作用的改善示例。雖然在出現靜電相互作用時，向流動相中添加鹽便可抑制，在發生疏水相互作用時，選擇哪種添加試劑是非常重要的。

另外，由于添加試劑可能會導致生物大分子的結構發生顯著變化、失活或變性，因此需要特別注意。

03

色譜柱的老化處理

在SEC色譜柱的使用初期，常會出現蛋白質多聚體等物質吸附于色譜柱的現象。防止該現象的對策是可以對色譜柱進行老化處理（預處理）。

01

色譜柱老化處理示例1：

將目標樣品（相對含有較多多聚體的情況）重復進樣5～10次，然后進行清洗。

02

色譜柱老化處理示例2：

將市售的人血清（10 g/L、過濾樣品）重復進樣5～10次，然后進行清洗。

請在色譜柱的老化處理后分析目標樣品，確認多聚體等物質的洗脫峰面積已經穩定。不過，色譜柱的老化處理是最后的辦法，建議大家盡量去找到合適的流動相以抑制吸附。

寫在最后

關于生物大分子SEC分析中流動相的優化方法、改善分離相關的文獻和技術資料，我們已經整理出來并附上了鏈接，請

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