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液相色譜方法開發中紫外吸收波長的選擇
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（圖片來源：包圖網）
液相色譜方法開發過程中，樣品的紫外吸收波長對開發結果具有舉足輕重的影響。對于許多樣品而言，只有仔細選擇合適的檢測波長，才能得到良好的分離效果。選擇波長時需了解各樣品組分的UV光譜，若能取得被測物的標準品，可較快獲得各樣品組分的UV圖譜，應用DAD還可獲得大量的其他補充信息。
選擇吸收波長一般包含（不限于）
以下幾種考慮
1、不光考慮目標物的最大吸收波長，同時要考慮樣品干擾物吸收值最小的波長。
2、飽和烴類以及其氨基或氰基衍生物是僅有的一類完全不適合UV檢測的有機化合物。
3、被特定基團（-O-、-OH、-Cl、-COOH、-COOR）取代的飽和烴類具有臨界吸收值，可能需在短波長處（185-210nm）檢測。
4、除上述幾類化合物外，一般化合物都能在較長波長（>210nm）檢測。下表列出各種官能團的最大波長與摩爾吸收系數。
一些常用官能團的最大吸收波長與摩爾吸收系數
5、流動相組分的紫外本底吸收。此項考慮涉及到溶劑的種類選擇、流動相pH選擇以及流動相緩沖鹽選擇等。有些酸有紫外本底，如甲酸，乙酸；有些沒有，如磷酸。這樣，在使用較低波長檢測的方法時，就要考慮使用紫外本底小的酸。冰醋酸在短波長檢測下應該慎用。水在180nm以上實際無吸收，可忽略其影響。正相色譜所用溶劑的吸收度通常更強，所以一般需在長波長檢測。
反相流動相組分的UV吸收值與波長的關系
正相溶劑的UV吸收值與波長的關系
6、最大吸收波長λmax與化學結構的關系。紫外光譜提供了分子中生色團和助色團的信息，目前雖不能精確計算紫外特征吸收峰，但已總結出各種經驗規則。最早提出的Woodward（伍德沃德）和Fieser（費塞爾）規則可用來估算二烯烴，多烯烴及共軛烯酮類化合物的最大紫外吸收波長。
多烯烴類與α，β－不飽和酮類紫外吸收的經驗規則
母體
C=C-C=C(在己烷中)
(1）無環二烯烯烴或
異環二烯經217nm
(2）同環二烯烴253nm
C=C-C=C215nm
(在乙醇中)
環內雙鍵加
3639
環外雙鍵加
55
延伸雙鍵加
3030
共軛體系上
取代烷基加
5
α，10；β，12；γ，δ，18
助色團
RCOO加
0
α，β，γ，δ，6
RO加
6
（OCH3）α，35；β，30；
γ，17；δ，31
RS加
30
β，85
Cl加
5
α，15；β，12
Br加
5
α，25；β，30
NR2加
60
β，95
參考資料：
1.?實用高效液相色譜法的建立［美］L.R.森德爾 J.J.柯克蘭 J.L.格萊吉克 著．張玉奎 王杰 張維冰 譯．
2.?基礎有機化學（第三版）．刑其毅 裴偉偉 徐瑞秋 裴堅．
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