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抗體藥物偶聯物(ADC)的DAR分析表征
抗體-藥物偶聯物（ADC）作為一種生物治療候選藥物是近年來的研究熱點。ADC藥物是將單克隆抗體的腫瘤特異性和靶向性與高效的小分子藥物的細胞毒性結合成一個新的藥物分子，從而形成有效的抗癌治療劑。這些分子由三部分組成：單克隆抗體、穩定的連接物以及細胞毒性小分子藥物。
ADC藥物的藥效和清除率都與藥物抗體偶聯比（DAR）值有關，因此在藥物開發過程中必須對其精確分析。尺寸排阻色譜法和疏水色譜法是在天然生理條件下檢測DAR的兩種最常用的方法。
在本應用中，我們通過SEC-MS和HIC-UV法來對一個半胱氨酸偶聯的ADC藥物模擬物進行分析。該模擬物是由LC-SMCC交聯劑將丹磺酰基螢光團共價鍵合到IgG1-mAb上，形成一個載藥量不同（0-8）的抗體混合物。
圖1.?半胱氨酸偶聯的ADC模擬物
圖2.?半胱氨酸偶聯的ADC的異質性
實驗部分
在SEC-MS方法中，我們選用TSKgel SuperSW3000尺寸排阻色譜柱。將ADC注入該色譜柱中，HPLC系統與質譜相連，用于檢測DAR譜圖。從譜圖中觀察到，每個主峰之間的分子量差異為1336 Da，對應兩個丹磺酰基熒光團分子的分子量。SEC/MS分析表明，平均DAR為3.9 。
圖3.?ADC模擬物的SEC/MS譜圖
然后，使用疏水色譜柱TSKgel Butyl-NPR和UV檢測，來確認DAR分布情況。mAb抗體結合的藥物分子數越多，ADC的疏水性越大，在HIC固定相上的保留時間更長，載藥量不同的組分便可得到分離。從DAR譜圖中可以看到，DAR=0-8的各峰之間分離情況很好。
圖4.?ADC模擬物的HIC-UV譜圖
結果與討論
SEC-MS和HIC-UV是有效表征ADC的DAR譜圖的兩種方法。在TSKgel SuperSW3000色譜柱上，使用了質譜兼容的流動相，通過高分辨率ESI-MS檢測，驗證藥物模擬物中ADC組分的分子量。
HIC-UV方法中，使用TSKgel Butyl-NPR色譜柱對樣品中各種抗體-載荷的ADC異構體進行疏水性分析，進一步確認其DAR分布。結合這兩種分析方法，可以有效驗證ADC生物大分子的DAR譜圖。
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