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【一文了解】靶向蛋白組學定量技術SRM & MRM
01
·什么是SRM/MRM·
擬靶向掃描特定離子監測(SRM), 也通常稱為多重反應監測 (MRM), 是復雜樣品中靶蛋白定量的重要技術。SRM/MRM技術可以在復雜的系統中實現對靶蛋白的快速、靈敏、特異的定量，并具有良好的定量再現性。SRM/MRM技術消除了大部分非目標檢測，使噪聲信號大大降低，檢測靈敏度顯著提高。與ELISA相比，SRM/MRM具有更好的再現性、更高的產量、更低的開發成本和更高的穩定性。目前，SRM/MRM已迅速發展成為靶技術的代表性技術，并被視為基于質譜的蛋白質定量的“金標準”。
通過MRM/SRM技術進行實時定量監測有助于一系列研究，包括藥代動力學、臨床診斷、違禁物質檢測、食品和化妝品的工業質量控制、環境監測、農業植物研究，以及代謝組學和基于蛋白質組學的蛋白質翻譯后修飾和生物標志物發現相關研究。
02
·SRM/MRM 原理·
SRM/MRM技術是基于已知或假設的反應性離子信息，針對性地選擇數據進行質譜信號采集，去除不符合干擾的離子信號，通過數據質譜獲得質譜定量信息。該技術中使用的主要儀器是三重四極質譜儀，其中第一和第三四極用作質量過濾器，專門選擇與預設質荷比相同的肽離子（前體離子）。而碎片離子（產物離子）通過第二個四極作為碰撞細胞，通過CID（碰撞誘導解離）方式將前體離子擊碎產生離子。SRM技術具有高選擇性，降低了背景噪聲和離子干擾。
03
·SRM/MRM 技術優勢·
??高靈敏度：通過使用兩級離子選擇，消除了廣泛的干擾離子，降低了質譜的化學背景。這顯著提高了目標分析物的信噪比，實現了檢測的高靈敏度。
??優異的再現性：MRM選擇性地獲取質譜信號，避免了目標分子的電離、質譜信號的抑制以及源內碰撞引起的碎片化的影響。結果，再現性相應地提高。
??高精度：利用MRM技術的特異性，進行連續的增強離子掃描，生成高分辨率串聯質譜（MS/MS）片段數據。與全掃描和中性損耗質譜掃描模式相比，這降低了分析過程中定性結果的假陽性率，確保了分析的準確性。
??高通量：利用最先進的質譜系統，MRM技術可以在每個工作循環中處理多達300對前體碎片離子。這一特性為研究眾多蛋白質的各種修飾和豐度變化提供了機會，有效地滿足了蛋白質組學的研究需求
??無需抗體：適用于因缺乏抗體而無法使用蛋白質印跡或ELISA進行定量分析的蛋白質的驗證和定量。這包括來自高度同源蛋白質家族的蛋白質、翻譯后修飾的蛋白質（如磷酸化和甲基化的蛋白質），以及來自植物、微生物和模式生物的蛋白質。
04
·SRM/MRM與免疫測定法
的比較·
SRM/MRM與我們常用的無標記iTRAQ/TMT定量蛋白質組學方法在質譜硬件和數據采集模式方面都有所不同。SRM/MRM采用基于三重四極質譜的選定掃描模式。借助于這種獨特的數據采集方法，類似于WB和ELISA分析，SRM/MRM允許對靶蛋白進行選擇性和特異性定量（或絕對定量）分析。
接下來看看SRM/MRM與WB和
ELISA相似和區別？
SRM/MRM vs. WB, ELISA.
SRM/MRM是無標簽、iTRAQ/TMT和其他組學技術的寶貴伴侶。鑒于大規模組學技術中不可避免地會出現定量假陽性，結果往往需要通過特定的檢測方法進行驗證。最傳統的方法包括WB和ELISA，SRM/MRM也經常用于驗證目的。
05
·SRM/MRM 工作流·
SRM/MRM分析開發。這是該方法的核心。首先，應從光譜庫生成或Skyline軟件中選擇2或3個靶向肽。所選擇的肽應該是感興趣的蛋白質所特有的，并且易于通過LC-MS檢測。它們還不需要缺失的切割位點和頻繁修飾的氨基酸。還應選擇產物離子。其次，應優化檢測條件，如碎片能量和循環時間。第三，在x軸上建立了相應的濃度比和y軸上的峰面積比的工作線性曲線。樣品分析。消化后，樣品在三重四極質譜儀上進行。數據將使用Skyline軟件進行分析：
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