分享至
小融科普 | 耳聾基因檢測技術現狀
耳聾是致殘性疾病，嚴重影響人們的溝通交流及生活質量。有統計數據顯示，約60％的重度耳聾為遺傳性耳聾，這種類型的耳聾目前尚無有效的治療方法。因此，減少遺傳性耳聾的發生重在早期預防及干預，其中，明確耳聾病因是關鍵。分子診斷是目前檢測遺傳性耳聾基因突變位點的主要方法，它可以在分子水平明確耳聾病因，實現遺傳性耳聾的輔助診斷，為遺傳性耳聾的精準治療及精準預防提供理論基礎。隨著基因診斷技術的進步，耳聾基因檢測技術種類越來越多，今天，小融就帶大家一起來了解一下各種類型的耳聾基因檢測技術。
1.基因芯片技術
基因芯片技術于1995年被首次提出，該技術利用微陣列方法，將檢測探針通過光刻原位合成或點樣技術固定在芯片上，待測基因經擴增、熒光標記后與芯片雜交，最后通過激光共焦掃描及分析軟件判讀結果。
基因芯片技術高通量、微型化、自動化，結果易判讀，是目前臨床應用比較廣泛的耳聾基因檢測方法，但該技術的不足之處是：對DNA質量要求高、可檢測的突變位點有限，固相基因芯片信噪比較高、結果判讀需依賴昂貴掃描儀，這些都限制了芯片法在臨床的開展普及。
2.新一代測序（NGS）技術
新一代測序技術，又被稱為“高通量測序技術”。NGS通過提取基因組DNA，將序列打斷至一定的長度，進行文庫制備，按照測序流程捕獲目的DNA片段，通過富集純化進行測序。NGS技術能一次并行對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定，就耳聾基因研究和基因診斷而言，基于靶向捕獲和高通量測序，可針對絕大多數已知耳聾基因進行一次性全序列突變檢測。
相比第一代測序技術，二代測序技術具有更高的位點通量的優點。但其檢測出的未知突變是否與耳聾相關，需大量數據和生物信息學分析手段來判定。
3.實時熒光檢測技術
在耳聾基因檢測中，采用實時熒光檢測技術的檢測方案包括采用多色溶解探針檢測技術（MMCA）、基于Taqman 探針的實時熒光檢測技術。MMCA 的原理為針對突變位置設計引物和標記探針，根據探針結合時的溶解溫度曲線對目標位置進行基因分型。采用實時熒光檢測操作可以有效避免PCR擴增產物的污染，若配合自動化判讀軟件，則判讀結果相對簡單。但是該方法單管檢測突變位點具有局限性，當檢測的目標位點突變較多時，需要使用較多的檢測管方可完成單樣本分析。若單批次的待測樣本較多時，需要多臺的PCR儀同時參與檢測，該方法檢測位點通量相對較低，因此更適合小型實驗室采用。與MMCA 相比，基于Taqman探針的實時熒光檢測技術的檢測位點通量更低，因此基于Taqman探針的實時熒光檢測技術更適合用于特定突變點的驗證。
4.基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜技術（MALDI-TOF MS）
MALDI-TOF MS技術由于其“軟電離”的原理，非常適合核酸、蛋白、多肽等生物大分子的檢測，已經在化學、生物、醫療衛生等眾多領域得到廣泛應用。MALDI-TOF MS技術用于核酸檢測的基本原理是：根據靶向序列（目標位點）設計PCR擴增引物，將提取好的核酸樣本進行多重PCR擴增；擴增產物用特異性的質量探針進行單個堿基的延伸反應；延伸反應產物存在分子量的差異，該差異即延伸反應結合的單個堿基的分子量，利用核酸質譜對延伸產物進行檢測，區別開延伸前后分子量的差異，從而得到核酸分型結果。
MALDI-TOF MS法樣本通量高，一臺儀器每日通量高達3000例，單樣本一次上樣可同時檢測數十個位點，高效準確，能滿足大量樣本檢測的需求，且儀器操作簡單，對人員技術要求低，適合第三方醫學實驗室等樣本量較多的場景使用。
QuanNUA核酸質譜解決方案
融智生物基于自主知識產權的新一代寬譜定量飛行時間質譜平臺（MALDI-TOF MS），目前已經開發出針對遺傳性耳聾基因檢測的全流程解決方案，該解決方案包含試劑盒、全自動點樣儀、質譜儀、數據處理軟件在內，只需一次上樣即可同時檢測4個遺傳性耳聾基因20余個突變熱點位點的突變情況，具有低成本、高靈敏度、高通量、高效率的特點，可完美滿足臨床檢測需求。
# 參考文獻 #
[1]李惠勤, 龍駒. 耳聾基因遺傳學診斷技術研究進展[J]. 現代醫學與健康研究, 2021(005-024).
[2]高穎婷, 丁海濤, 肖偉利,等. 遺傳性耳聾基因檢測技術應用進展[J]. 內蒙古醫學雜志, 2020, 52(2):4.
[3]查樹偉, 查佶, 傅雅麗,等. 耳聾基因檢測技術應用和研究現狀[J]. 中國生育健康雜志, 2018, 29(5):4.
[4]杜亞婷, 崔慶佳, 黃麗輝. 耳聾基因檢測技術的臨床應用進展[J]. 臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志, 2016, 30(8):4.
