血細胞計數板的計算方法
血細胞計數板的計算方法(高中生物)如下:
計數室的刻度一般有兩種規格,一種是一個大方格分成16個中方格,而每個中方格又分成25個小方格,共400小格;另一種是一個大方格分成25個中方格,而每個中方格又分成16個小方格,總共也是400小格。
我們數的是每個小格中的細胞數,要算一個大格中的細胞數,一個大格中有400個小格,所以要乘以400。
每一個大方格邊長為1㎜,則每一大方格的面積為1㎜2,蓋上蓋玻片后,載玻片與蓋玻片之間的高度為0.1㎜,所以計數室的容積為0.1㎜3。其計算方法如下:
1.16×25的計數板計算公式:
細胞數 ml=(100小格內的細胞數 100)×400×1000×稀釋倍數
2.25×16的計數板計算公式:
細胞數 ml=(80小格內的細胞數 80)×400×1000×稀釋倍數
操作方法:
1.視待測菌懸液濃度,加無菌水適當稀釋(斜面一般稀釋100倍),以每小格的菌數可數為度。
2.取潔凈的血球計數板一塊,在計數區上蓋上一塊蓋玻片。
3.將菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計數板中間平臺兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴(不宜過多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區,勿使氣泡產生,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。
也可以將菌懸液直接滴加在計數區上(不要使計數區兩邊平臺沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,造成計數區深度的升高),然后加蓋蓋玻片(勿使產生氣泡)。
4.靜置片刻,使細胞沉降到計數板上,不再隨液體漂移。將血球計數板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩,先在低倍鏡下找到計數區后,再轉換高倍鏡觀察并計數。由于生活細胞的折光率和水的折光率相近,觀察時應減弱光照的強度。
5.計數時若計數區是由16個中方格組成,按對角線方位,數左上、左下、右上、右下的4個中方格(即100小格)的菌數。如果是25個中方格組成的計數區,除數上述四個中方格外,還需數中央1個中方格的菌數(即80個小格)。
6.對于出芽的酵母菌,芽體達到母細胞大小一半時,即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2-3次(每次數值不應相差過大,否則應重新操作),按公式計算出每mL(g)菌懸液所含細胞數量。
7.測數完畢,取下蓋玻片,用水將血球計數板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風機吹干,放入盒內保存。