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氨基柱做反相使用時的原理

2021.6.18

氨基柱在含水量多的情況下是很不穩定的。也不宜在強酸的環境下使用。用的是緩沖液則先用水/乙腈清洗再用乙腈,.氨基住其本質屬于正相柱,使用氨基柱除了采用正相系統作為流動相以外,一般還采用乙腈-水作為流動相,但是要求乙腈的含量不得低于80%,含水過多的流動相對氨基柱有損害,一般盡量不要用含水過多流動相。建議用小流速的異丙醇沖洗過夜試試。氨基柱是同時可以用于正相條件和反相條件的,這一點很多用戶都已經知道;但是要注意到的是:正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的,對這一點的忽略可能會帶給使用者一些麻煩。NH2柱是在硅膠上鍵合一個5碳NH2;CN柱是在硅膠上鍵合一個5碳CN基;NH2.CN都為兩相柱.
對于新購買到的柱子,首先請注意打開分析測試說明書,了解柱子的保存溶劑。如果保存溶劑與你將要使用的流動相極性不同不會互溶,請先用異丙醇過渡。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大,會導致柱壓很高,適當調低流速即可。如果要使用的流動相中還含有緩沖鹽類,建議在用分析流動相之前,先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內的析出。反相條件下使用時,要特別注意控制PH值范圍,PH值越低越有發生水解的危險,流動相中水的比例越高當然也越有發生水解的危險。所以,在使用后以及準備長時間放置該柱時,必要的清洗和將氨基柱保存于純的有機溶劑中是很好的保養措施。
簡單說起來,正相條件下使用的氨基柱你就參照硅膠柱的清洗方法;反相條件下使用的氨基柱你就參照C18的清洗方法。
平時在正相條件下使用:
首先用50倍柱體積的異丙醇清洗,因異丙醇粘度較大可適當放低流速;之后,用50倍的甲醇清洗;之后,用異丙醇過渡回到平常使用的正相流動相,即可。
平時在反相條件下使用:
緩沖鹽應及時沖洗,以及不能直接用純甲醇沖洗緩沖鹽等,屬常識就不作特別交待了。
用50倍純甲醇沖洗;之后,用異丙醇過渡后,用二氯甲烷沖洗色譜柱;之后,再用異丙醇過渡回來到甲醇條件下。
這些清洗方法,主要是針對當樣品中有雜質逐步吸附累積到填料上時的處理方法,色譜柱表現行為為諸如柱壓增高柱效降低等

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